BIOTEOMED.ORG

A  RENDSZERBIOLÓGIA  

IMMUN  DIALEKTUSA  

Dr. Berki Tímea, Dr. Engelmann Péter, Pap Ramóna, Dr. Simon Diána (2014): Immunológia Alapjai

http://www.immuntananyag.pte.hu/#intro

Erdei Anna, Sármay Gabriella, Prechl József (2012): Immunológia / Medicina Könyvkiadó Zrt.

http://www.tankonyvtar.hu/hu/tartalom/tamop425/2011_0001_524_Immunologia/ch17.html

Richard Hunt (Ed.):   Microbiology and Immunology On-line

http://www.microbiologybook.org/book/

Fókuszban: Zika vírus - 2017

WHO Situation Report 2017. március 10. (összehasonlításként → WHO Situation Report 2016. október 13.):

• eddig 84 ország/terület számolt be vektor-közvetített Zika fertőzésről.

→ 2016. októberben ez a szám: 73 ország/terület.

• 64 ország számolt be vektor moszkító betelepülésről, dokumentált fertőzés nélkül.

• 13 országban észleltek emberről-emberre közvetített Zika fertőzést.

→ 2016-ban ez a szám: 12 ország/terület

• 31 ország/terület számolt be Zika vírusfertőzéssel társult mikrokefáliáról és a központi idegrendszer kóros elváltozásairól.

→ 2016. októberben ez a szám: 22 ország/terület

• 23 ország/terület jelezte a Guillain-Barré szindróma (GBS) fokozott előfordulási gyakoriságát és/vagy a GBS betegek laboratóriumi tesztekkel igazolt Zika fertőzöttségét.

 Eddig megismert Zika-jellemzők (részletes előzményeket lásd → 2016/Aktuális) :

• A Zika vírus kezdetben szórványosan jelentkező, enyhe lefutású megbetegedéseket idézett elő.  
• A vírus szóródása kezdetben lassú (Kelet-Afrika → Nyugat-Afrika, ± Ázsia), majd felgyorsult (Ázsia → Csendes óceán térsége → Amerika) és ma már flavivírus-endemiás (Dengue vírus, Nyugat-nílusi vírus) területeken is terjed.
• Az első regisztrált járványt követő fertőzések súlyossága biogeográfiai eltéréseket mutat (Thaiföld <<< Brazília).
• A Zika-fertőzés terjedését illetően:
  

Igazolt Zika vírus vektorok a természetben (vírusRNS kimutatása): 

Aedes (Ae.) africanus, Ae. furcifer, Ae. luteocephalus, Ae. vittatus, Ae. dalzieli, Ae. hirsutus, Ae. metalicus, Ae. taylori, Ae. aegypti, Ae. unilineatus, Anopheles coustani, Culex perfuscus, Mansonia uniformis

Igazolt Zika vírus vektorok (vírusRNS kimutatása) urbánus környezetben: 

Ae. aegypti (Dengue flavivírusnak is vektora) > Nigéria, Malaysia, Indonézia, Francia Polinézia

Ae. albopictus (Chikungunya alphavírusnak is vektora) > Gabon, Brazília

[Smartt Ch.T.et al. (+11)(2017): Evidence of Zika Virus RNA Fragments in Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) Field-Collected Eggs From Camaçari, Bahia, Brazil     J Med Entomol tjx058.  doi: 10.1093/jme/tjx058]

Ae. hensilli (???) > Yap sziget (rovar jelenlét nagy mennyiségben, ám Zika RNS nem volt kimutatható)

Ae. polynesiensis (???) >  Francia Polinézia (rovar jelenlét nagy mennyiségben, ám Zika RNS nem volt kimutatható)

További rovarfajok? Nem-rovar vektorok?

• Az emberről-emberre terjedő fertőzés igazolást nyert.

a/ horizontális (nemi úton ✔  vértranszfúzóval ✔   további testfolyadékokkal ?)
b/ vertikális (fertőzött anyától magzatnak)

[Basu R., Tumban E. (2016): Zika Virus on a Spreading Spree: what we now know that was unknown in the 1950’s  Virol J. 13: 165.     PMCID: PMC5053350]

• Tekintettel a Flaviviridae családtagok közötti szerológiai keresztreakciókra és a Zika fertőzés szerológiai kimutatásának kérdéses érzékenységére, a Zika fertőzés (RNS) kimutatásának jelenlegi standard módszere a testnedv minták laboratóriumi RT-qPCR analízise (Reverse Transcription Quantitative real time Polymerase Chain Reaction). 

A laboratóriumi RT-qPCR analízis mellett napjainkban kialakuló gyakorlat a vírusfertőzés helyszíni Point-of-Care (POC) kimutatása egy órán belül, legelőnyösebben nyálmintában, PCR készüléket mellőző, hordozható egyszerhasználatos mikrofluid kazettás rendszerrel (reverz transzkripció + izotermális nukleinsav amplifikáció + kolorimetriás detektálás > érzékenység = 5 PFU). A helyszíni POC kimutatás további kiterjesztése: okostelefon alkalmazás bevonása a nukleinsav amplifikáció vezetéknélküli aktiválásában, követésében és elemzésében.

[Eboigbodin K. et al. (2016): Rapid molecular diagnostic test for Zika virus with low demands on sample preparation and instrumentation    Diagnostic Microbiology and Infectious Disease  86: 369–371.]
[Song J. et al. (2016):  Instrument-Free Point-of-Care Molecular Detection of Zika Virus    Anal Chem. 88: 7289–7294.]
[Priye A. et al. (2017): A smartphone-based diagnostic platform for rapid detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses   Scientific Reports 7, Article number: 44778   doi:10.1038/srep44778]

• Molekuláris evolúcióval - genetikai rekombinációval - kialakult Zika vonalak: Zika-Afrika (kelet- és nyugat-afrikai genotípusok), Zika-Ázsia, a két vonalban több mint 95% aminósav egyezés a vírusburok 'E' (envelope) fehérje szekvenciában (neutralizáló ellenanyag célpont). 

A két vírusvonal eltérő szaporodási kinetikáját a veleszületett természetes védelmet képviselő dendritikus sejtek in vitro rendszerében igazolták (dendritikus sejtek = testszerte előforduló hivatásos antigén-felismerő és bemutató sejtek, amelyek többek között a fertőzést elimináló CD8+ T sejteket aktiválják). Megfigyelések szerint a Zika-Afrika vonal fokozott replikációja (nagy vírusszám) vírusindukált sejthalálhoz vezetett. Úgy tűnik, evolúciós előnyt jelent a Zika-Ázsia vonal csökkent replikációs kinetikája, ami a fertőzött sejtekben nem indukált sejthalált.
Dendritikus sejtek in vitro fertőzése nyomán csekély sejtaktiválódás volt tapasztalható: az I. típusú interferon (IFN1) transzláció gátolt, ami a vírus szaporodásának előnyös. Megoldásként ígéretes lehetőség az RLR receptorcsalád (RIG-1-like receptors) aktiválható jelátviteli útvonala, ami potenciális célpont lehet a vírusellenes terápiában.

[Bowen J.R., Quicke K.M., Maddur M.S., O’Neal J.T., McDonald C.E., Fedorova N.B., Puri V., Shabman R.S., Pulendran B., Suthar M.S. (2017): Zika Virus Antagonizes Type I Interferon Responses during Infection of Human Dendritic Cells   PLOS Pathogens  https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1006164]
[Yueh-Ming Loo and Michael Gale, Jr. (2011):  Immune signaling by RIG-I-like receptors   Immunity  34: 680–692.]

• A vírus szóródásának biogeográfiai szekvenciája: Kelet-Afrika > Nyugat-Afrika > Ázsia > Csendes óceán térsége > Amerika, és ez utóbbival kialakuló új vírusvonal: Zika-Amerika.

Genom szekvenciaanalízis és diverzitás adatok (2017) igazolják, hogy az alapító Zika-Amerika vírusvonal a Zika-Ázsia genotípusból vált ki és genetikai diverzitása jelenleg elmarad a forrás Zika-Ázsia vonal genetikai diverzitásától. A két vírusvonal genetikai diverzitása közötti nagy eltérés (Zika-Ázsia >> Zika-Amerika) a közeljövőben várhatóan csökken (> vírusszóródást kísérő mutációs evolúció az amerikai kontinensen).  

A Zika-Amerika vonal kiindulási csomópontja feltehetően Északkelet-Brazília és/vagy a Karib térség területe, az időzítés 2014. január-február tájéka, tehát hónapokkal/egy évvel a járványok jelentkezése előtt. Következésképpen, a diagnosztikai eszköztár fejlesztése és a diagnosztikai érzékenység fokozása a közeljövőben kiemelt hangsúlyt kap.

[Matranga C.B. et al. (+26)(2014): Enhanced methods for unbiased deep sequencing of Lassa and Ebola RNA viruses from clinical and biological samples   Genome Biol. 15: 519. PMCID: PMC4262991]

[Faria N.R. et al. (+73)(2017): Establishment and cryptic transmission of Zika virus in Brazil and the Americas  Nature Letter doi:10.1038/nature22401]

[Metsky H.C. et al. (+64)(2017): Zika virus evolution and spread in the Americas  Nature Letter doi:10.1038/nature22402]

[Quick J. et al. (+27)(2017): Multiplex PCR method for MinION and Illumina sequencing of Zika and other virus genomes directly from clinical samples   Nature Protocols 12, 1261–1276 (2017) doi:10.1038/nprot.2017.066]

• A 2015-2016-ra kialakult járványok a Zika vírus neurotrop hatásáról, az embrionális neurogenesist és az érett idegrendszeri funkciókat romboló (pl. szenzoros polyneuropathia) neurodegeneratív hatásokról értesítenek. A Zika neurotropizmus kísérletesen megerősített jelenség.
  

[Bayless N.L. et al. (2016): Zika Virus Infection Induces Cranial Neural Crest Cells to Produce Cytokines at Levels Detrimental for Neurogenesis  Cell Host & Microbe 20: 423-428.]

[Li H. et al. (2016): Zika Virus Infects Neural Progenitors in the Adult Mouse Brain and Alters Proliferation  Cell Stem Cell 19: 593–598.]

[Nowakowski T.J. et al. (2016): Expression Analysis Highlights AXL as a Candidate Zika Virus Entry Receptor in Neural Stem Cells      Cell Stem Cell 18: 591-596.]

[Chavali P.L. et al. (+15) (2017): Neurodevelopmental protein Musashi-1 interacts with the Zika genome and promotes viral replication   Science 357: 83-88.]

[Ling Yuan et al (+22) (2017): A single mutation in the prM protein of Zika virus contributes to fetal microcephaly  Science  DOI: 10.1126/science.aam7120]

További lépés a Zika neurotropizmus kísérleti megközelítésében: egér modell felállítása a Flavivírus fertőzéseket kísérő neurokognitív zavarok követésére. Az első tapasztalat-sorozatra West Nile vírussal (WNV) fertőzött egér modellben tettek szert. 
→ Akut fertőzésben és a fertőzést túlélő egér populációkban kimutatható a preszinapszis vesztés, a preszinaptikus idegvégződés degradációja, amely nem terjed tovább az axonokra. A WNV-fertőzött egér agy hippocampus régióban tapasztalt preszinapszis vesztés közvetítői: komplement kaszkádot beindító C1qa komponens + C3 komplement + C3 komplement degradációs termékeket felismerő mikroglia sejtfelszíni C3aR receptorok + mikroglia sejtek fagocitózis gépezete (kompartment, enzimek és kódoló gének).

A fenti tapasztalatok egyik fontos üzenete: érett B limfocita-hiányos fertőzött egerek hippocampus régiójában szintén észlelhető volt a preszinapszis vesztés. Mindez tapasztalati példa az érett B sejtes immunreakcióktól független komplement aktivitásra, flavivírus fertőzés nyomán.

[Vasek M.J. et al. (+21)(2016): A complement–microglial axis drives synapse loss during virus-induced memory impairment  Nature 534:  538-543.  LETTER doi:10.1038/nature18283]

Felvetődő kérdések: 

1.   A kezdetben szinte ismeretlen Zika vírus 

• terjedésének, 
• biogeográfiai változatainak,
• által kiváltott járványok fokozódó súlyosságának

biológiai, fizikai, meteorológiai, geológiai és szociális kiváltó/segítő tényezői?  E tényezők közül néhány már ismertté vált (részletesen → 2016/Aktuális).  

Tágabb értelmezésben: mely biológiai-epidemiológiai-szocioökonómiai meggondolások (populáció nagyság, geno- és fenotípusos változékonyság, populációs korpiramis, társadalmi normák és motivációk, tradíciók ...) és mely matematikai modellek (statisztikai, gépi-tanulásos, kompartment-SIR, -SIS, -MSIR, -SEIR, MSEIR, -SEIS, -MSEIS ...) segítenek a fertőző kórokozók intra- és interpopulációs terjedésével társuló járványok -esetünkben a Zika járvány- ciklikus fellépése-eltűnése-újraéledése előrejelzésében és kezelhetőségében?    

[Neil M.Ferguson et al (+7) (2016): Countering the Zika epidemic in Latin America  Science 353: 353-354.]           

[Siettos C.I., Russo L. (2013): Mathematical modeling of infectious disease dynamics  Virulence  4: 295–306.]

[Kuniyoshi M.L.G., dos Santos F.L.P. (2017): Mathematical modelling of vector-borne diseases and insecticide resistance evolution  J Venom Anim Toxins Incl Trop Dis. 23: 34.  PMCID: PMC5501426]

          Bonyah E.,Khan M.A.,Okosun K.O.,Islam S. (2017):  A theoretical model for Zika virus transmission  PLoS One. 12(10):            e0185540.  PMCID: PMC5627930

2. Flavivirus genus (Dengue vírus/DENV, Nyugat-nílusi vírus/WNV, sárgaláz vírus/YFV, Japán encephalitis vírus/JEV, kullancs encephalitis vírus/TBE) vizsgálatok Zika vírusra adaptálható tanulságai? 

3. Gazdaszervezet immun előzményei, aktuális státusza, korábbi flavivírus-fertőzés (DENV, WNV...) által generált gyenge vagy nem neutralizáló ellenanyagok jelenléte, mindezek súlyosbító hatása a rokon antigenitású Zika fertőzés lefolyására; lehetőség ADE (Antibody-Dependent Enhancement)  és  OAS (Original Antigenic Sin)  fellépésére?

                               

Kísérleti megközelítésben Human anti-DENV monoklonalis ellenanyag + Zika vírus adagolása in vitro myeloid U937 sejtvonalhoz  ⇒ sejttenyészet felülúszójában vírus titer meghatározás, a fertőzött sejtek FACS analízise ⇒ Zika-ADE  in vitro  megfigyelése. [Dejnirattisai W. et al.(2016): Dengue virus sero-cross-reactivity drives antibody-dependent enhancement of infection with zika virus     Nat. Immunol. 17: 1102-1108.]   Figyelemre méltó, hogy Zika-ADE-t előhívó anti-DENV ellenanyagok gyenge neutralizáló ellenanyagok. DENV fertőzést követő Zika fertőzés időzítése kritikus, mert a keresztreagáló ellenanyagok védő vagy betegségfokozó hatása idővel változhat. Kísérleti megközelítésben Human anti-DENV plazma VAGY human anti-WNV plazma VAGY plazmából tisztított IgG  adagolása in vitro myeloid K562 sejtvonalnak majd Zika vírussal fertőzés ⇒   Zika-ADE in vitro megfigyelése. ÉS  Human anti-DENV plazma VAGY human anti-WNV plazma VAGY plazmából tisztított IgG injektálása egérbe, majd fertőzés Zika vírussal ⇒ Zika-ADE in vivo megfigyelése. [Bardina S.V. et al.(2017): Enhancement of Zika virus pathogenesis by preexisting antiflavivirus immunity  Science  356: 175-180.]    Figyelemre méltó, hogy  alacsony plazma koncentráció, alacsony ellenanyag titer vezetett Zika-ADE kialakulásához, amit láz (≥ 38 oC) és fokozott virémia (tesztisz, gerincvelő) kísért. anti-DENV ellenanyaggal összehasonlítva, az anti-WNV ellenanyag kevésbé kedvez Zika-ADE kialakulásának.  Korábbi flavivírus (DENV/WNV/...) fertőzést követő Zika fertőzés: OAS lehetősége? [Mee Sook Park et al.(2016): Original Antigenic Sin Response to RNA Viruses and Antiviral Immunity  Immune Netw. 16: 261-270.] 'Original antigenic sin' kifejezés forrása: Francis T. Jr. (1953): Influenza: The Newe Acquayantance   Ann. Int. Med. 39: 203-221.  DOI: 10.7326/0003-4819-39-2-203 A jelenség immunbiológiai alapja a vírusokra jellemző gyors szaporodás és az azt kísérő változatos antigenitás. A jelenség értelmezése: első antigén változat immunválaszt meghatározó - imprintáló - képessége.    Eredetileg influenza vírusfertőzésben megfigyelt jelenség, amikor adott influenza vírustörzs-okozta első fertőzésben a jellemző vírus antigén(ek) - Ag1 változat - által kiváltott immunológiai imprinting nyomán az adott vírustörzzsel történő későbbi újrafertőződéskor az újrafertőző törzs eltérő vírus antigénje(i) - Ag2 változat - ellenére a gazdaszervezetben az Ag1 változatra specifikus ellenanyagok termelődnek.

 

Korábbi nem-flavivírus fertőzésnek van-e hatása Zika fertőzés lefolyására?  

4. Zika-szelektív szerodiagnosztikai, vagy szero-genodiagnosztikai fejlesztések?

Zika-fertőzés kimutatása - diagnosztikai időablakok a jelenlegi ismeretek tükrében - Szérum minta: néhány nappal a tünetek megjelenése előtt és után. Teljes vér minta: virémia a tünetek megjelenését követő 2 hónapban (megerősítést igényel). IgM ellenanyag titer: tünetek megjelenését követő 4-7 naptól kb.12 hét. Neutralizáló ellenanyag: évekig kimutatható. Vizelet minta: szérumhoz képest nagyobb vírustiter, tünetek megjelenését követő 7-14 (több?) nap. Nyál minta: szérumhoz képest nagyobb vírustiter, vizelet mintával összevethető időablak DE nem következetes jellegű minta. Marie Louise Landry and Kirsten St. George (2017): Laboratory Diagnosis of Zika Virus Infection. Archives of Pathology & Laboratory Medicine 141: 60-67.

5.  Járvány megelőzése ÉS embriogenesis védelme új koncepciókkal a vakcina tervezésben? 

A 2-3-4-5. kérdés megválaszolásához nélkülözhetetlen a vírus szerkezeti-funkcionális jellemzőinek ismerete. Ezt támogatja a Zika vírus szerkezetének további részletes feltárása. 

 

Az érett Zika vírus összehasonlító krio-elektronmikroszkópos vizsgálatáról 2016-ban számolt be Sirohi et al. [→ részletek 2016/Aktuális]. Az így kialakult szerkezeti képet 2017. januárban Prasad V.M. et al. bővítette az éretlen virion  krio-elektronmikroszkópos jellemzőivel (Zika Ázsia vonal H/PF/2013 törzs  + moszkító  C6/36 sejtek in vitro → 16h inkubálás 30^oC → leállítás NH₄Cl  → vizsgálat).

[Vidya Mangala Prasad, Andrew S Miller, Thomas Klose, Devika Sirohi, Geeta Buda, Wen Jiang, Richard J Kuhn & Michael G Rossmann (2017): Structure of the immature Zika virus at 9 Å resolution  Nature Structural & Molecular Biology  doi:10.1038/nsmb.3352  Published online 09 January 2017 ]

A krio-elektronmikroszkópos vizsgálatok eredményeként megszerkesztett vírus-térkép a vakcina tervezésben régi és új hangsúlyokat ad a további fejlesztésekhez.

1. Érett Zika virion jellemzők

• Vírusfelszínen kifejezett 'E' (envelope) fehérje dimerek; közöttük 'M' (membrane) fehérjék konformációs takarásban ('E' és 'M' transzmembrán fehérjék). 
• 'E' fehérje/glikoprotein domének és funkciók (DI-DII-DIII): 

* vírus célsejthez tapadása, célsejt felszínen receptor kötés (DIII);
* dimerizáció (DII);
* vírusfelszín+célsejt membránfúzió (DII disztális hidrofób, konzervált hurok);
* DII domén régiók rugalmas összetartásban;
* DII domén régiók közé pozicionált DI domén.

• 'E' glikoprotein a neutralizáló antitestek elsődleges céltáblája.

2. Éretlen Zika virion jellemzők
A vírus életciklus intracelluláris szakaszában a fertőzött sejt endoplazmás retikulumban összeszerelődő vírus partikulumok a trans-Golgi hálózat (TGN) felé haladnak; a TGN alacsony pH körülményei és a proteolitikus enzimatikus közeg biztosítja a vírusérés további lépéseit (> furin jellegű proprotein konvertáz/szerin proteáz enzim hasítja az éretlen virionra jellemző poliprotein fehérjét > szerkezeti és nem-szerkezeti fehérjék elkülönülnek, hasonlóan Dengue, Ebola, HIV, Influenza víruséréshez). 

• Vírusfelszínen 'E' (envelope) glikoprotein és 'prM' (precursor membrane) fehérjék alkotta trimerek.
  
• 'E' glikoprotein DII doménban a disztális hidrofób konzervált hurkot 'prM' fehérje 'pr' doménje inaktív (fedett) állapotban tartja (> 'prM' chaperon 'E' szerkezet kialakulásában). 
• Flavivírus proteolitikus érés:  'prM' fehérjéről a szolubilis 'pr' domén lehasad, az érett virion elhagyja a sejtet.  

[Stadler, K., Allison, S.L., Schalich, J. & Heinz, F.X. (1997): Proteolytic activation of tick-borne encephalitis virus by furin. J. Virol. 71: 8475–8481.]
[Yu, I.-M. et al (2008):. Structure of the immature dengue virus at low pH primes proteolytic maturation. Science 319: 1834–1837.]

• A 'pr' domén hasítása 'prM' fehérjéről lehet teljes, részleges, sőt, elmaradhat ⇒ a sejtből kiszabaduló vírusok az érett, a részlegesen érett és az éretlen virionok heterogén populációi.  

[Poonsook Keelapang et al.(2004): Alterations of pr-M Cleavage and Virus Export in pr-M Junction Chimeric Dengue Viruses  J Virol.  78: 2367–2381.] 

[Theodore C. Pierson and Michael S. Diamond (2012): Degrees of maturity: The complex structure and biology of flaviviruses  Curr Opin Virol. 2: 168–175.]

• Felszíni fehérje trimereken belül stabil konformációs kölcsönhatás ⇒ a vírusérést kísérő felszíni trimer → dimer (éretlen, részlegesen érett → érett) átrendeződés lassú, nehézkes.

• Zika vírus egyedi jellemző: vírusmembrán belső felületen capsid fehérje dimerekre utaló denz lerakódások > érett virionban hiányoznak. Vírusgenom védelme a vírusérés során?

Fentiek nyomán a fertőzött sejt(ek)ből kiszabaduló vírusok heterogén populációiban a részlegesen érett Zika virionok aránya várhatóan magas, amiből következik:

⇒ vírusburok antigén heterogenitás ⇒ érett vírusburokra jellemző konszenzus antigének is lehetnek térszerkezeti fedésben, esetleg hiányoznak ⇒ 'prM' fehérje részleges hasításával jobb hozzáférés éretlen vírusfelszíni epitópokhoz ⇒ több epitóp ellen és nagyobb arányban termelődő neutralizáló ellenanyagok ⇒ a hagyományos vakcináláson túl (pl. immunizálás inaktivált vírussal) új elgondolások körvonalazódnak a vakcina  tervezésben.   

Az új elgondolások egyike Pardi N. et al. (2017)  munkájában:
[Pardi N. et al. (+36)(2017):  Zika virus protection by a single low-dose nucleoside-modified mRNA vaccination   Nature  543: 248–251.]  

A kutatócsoport az immunizálást Zika vírus (Francia Polinézia H/PF 2013 törzs) 'prM-E' glikoproteineket koexpresszáló mRNS készítménnyel végezte. A vakcina jelölt készítményben az mRNS egy módosult nukleozidot tartalmaz (1-metil-pszeudouridin/m1Ψ).

m1Ψ nukleozid jelenléte mRNS-ben: in vivo transzláció fokozódik, mRNS immunogenitás csökken, mRNS stabilitás nő.  [Andriesa O. et al.(2015): N1-methylpseudouridine-incorporated mRNA outperforms pseudouridine-incorporated mRNA by providing enhanced protein expression and reduced immunogenicity in mammalian cell lines and mice       Journal of Controlled Release 217: 337–344.] A technika: *mRNS vakcina jelölt formulálása lipid nanopartikulumokban. *'prM'-'E' koexpresszáló mRNS > transzláció >>>  szubviralis  -éretlen-   részecskék szintézise. Immunizálás 1x intradermalis injekcióval.

Preklinikai tapasztalatok mRNS vakcina jelölttel - megfigyelések Rágcsálókban.

C57BL/6 egerekben (1x30 µg intradermális injekció) az 'E' protein specifikus szérum IgG szint az immunizálás utáni 8. héten érte el maximum értékét, és nem változott a 8-20. hét között.

Anti-Zika vírus neutralizáló ellenanyag (nAB) jellemzők:

A/ plakkredukciós neutralizációs teszt₅₀ (= PRNT₅₀ nAB assay) az immunizálás utáni 16. héten elérte a csúcstitert, ami a 20. hétig megfigyelhető volt.

B/ Zika vírus riporter partikulum teszt (RVP nAB assay) titere az immunizálás utáni 8. héten érte el a maximum értéket, ami a 20. hétig kb. fele értékre csökkent.

C/  fertőzés heterológ Zika törzzsel (Puerto Rico 2015 PRVABC59 törzs / intravénás 200 PFU) az immunizálás utáni 2. és 20. héten.

A 2. heti fertőzés után: kontroll 9 állatból 8 állatban a harmadik napon kimutatható a virémia (medián 14.000 kópia vírus RNS/ml vér). 

A Zika 'prM-E' mRNS-immunizált 9 állatban a virémia nem volt kimutatható.

A 20. heti fertőzés után három nappal a kontroll 5 állat mindegyikében kimutatható volt a virémia (medián 1200 kópia vírus RNS/ml vér). 

A Zika 'prM-E' mRNS-immunizált 10 állatban nem volt kimutatható virémia a heterológ fertőzést követő 3. és 7. napon.

Preklinikai tapasztalatok mRNS vakcina jelölttel - megfigyelések Főemlősökben

Nem-humán főemlős / Macaca Mulatta (Rhesus) majmokban  (intradermális 1x600µg vagy 1x200µg vagy 1x50µg injekció) az 'E' protein specifikus szérum IgG szint mindhárom dózissal a negyedik héten érte el a csúcstitert, amely érték mintegy harmadára csökkent a 12. hétig. 

 

Anti-Zika vírus neutralizáló ellenanyag (nAB) jellemzők:

A/ focus-(plakk)-redukciós neutralizációs teszt (FRNT) az immunizálás utáni 2-12. héten stabil titer értéket mutatott.

B/ Zika vírus riporter partikulum teszt (RVP nAB assay) titere az immunizálás utáni 2. hétről a negyedik hétre több mint másfélszeresre emelkedett.

C/ a neutralizáló ellenanyag tesztekben a Zika-Afrika és a Zika-Ázsia vonalak egy szerotípust mutattak, ami megerősítette az alábbi hivatkozásban leírtakat.   

Egy Zika Szerotípus megfigyelése → Dowd K.A. et al. (+13)(2016): Broadly Neutralizing Activity of Zika Virus-Immune Sera Identifies a Single Viral Serotype Cell Reports 16: 1485–1491.

Az egy Zika szerotípus lehetővé teszi megfelelően robusztus, hatékony ellenanyag preventív vagy terápiás bejuttatását a heterológ vírustörzsek neutralizációjára. Tekintve, hogy a neutralizáló ellenanyag termelődése és reakciója nem dózisfüggő, célszerű a legkisebb dózis (itt  1x50µg azaz kb. 0.02 mg/ kg) alkalmazása a nem-humán főemlősökben.

D/ fertőzés heterológ Zika törzzsel (Puerto Rico 2015 PRVABC59 törzs /subcutan injekció) az immunizálás utáni 5. héten.

Mind a 6 kontroll majomban a harmadik napra kialakult a virémia (medián 7000 kópia vírus RNS /ml vér). 

A Zika 'prM-E' mRNS-immunizált 5 majomból négy (három 50µg és egy 200µg dózissal immunizált) majomban nem volt kimutatható a virémia (< 50 kópia vírus RNS /ml vér) a fertőzést követő harmadik, ötödik és hetedik napon.  A legnagyobb dózissal (600µg) immunizált majomban a fertőzést követő harmadik napon enyhe virémia (100 kópia vírus RNS/ml vér) jelentkezett. Utóbbi szükségessé teszi a vizsgálatok megismétlését nagyobb kísérletes állatlétszámmal.

Pardi N. et al. (2017) fenti eredményeiben látható, hogy egyszeri alacsony dózisú intradermalis Zika 'prM-E' mRNS immunizálás egerekben és majmokban egyaránt védettséghez vezet. A tapasztalatok szerint a Zika 'prM-E' mRNS vakcina jelölt erőteljes neutralizáló ellenanyag választ indukál.  

További Zika vakcina jelöltek → Larocca R.A. et al. (2016) és Abbink P. et al. (2016) plazmid DNS vakcinával és inaktivált Zika vírus vakcinával végzett sikeres preklinikai vizsgálatai (a történetet lásd → 2016/Aktuális).

Összegezve: akár hagyományos, akár géntechnológiával előállított vakcina jelölt a jövő, a lényegi elvárások mindig ugyanazok:

• Biztonságos vakcina
• Tartós (életreszóló...) védettség kialakítása
• Gazdaságos nagyüzemi előállítás 

A Zika vakcina konstrukciók a preklinikai eredmények alapján, az ismeretek jelenlegi hiányosságát figyelembe véve, összehasonlíthatók.

Tisztított Inaktivált Vírus Vakcina fertőzés lehetősége ??? bármely választott fehérje (antigén) expresszióra adaptálható  módszer (nem értelmezhető)  több választott antigén koexpressziója                                     (nem értelmezhető)   nagyüzemi előállítása gazdaságos ✔  alacsony dózisú kétszeri bevitellel                             elérhető védettség ✔   gazdaszervezet korábbi flavivírus története befolyásolhatja a vakcina működését ✔

Vírusfelszíni Szerkezeti Fehérjéket Kódoló plazmid DNS Vakcina gazdagenomba integrálódás lehetősége ??? bármely választott fehérje (antigén) expresszióra adaptálható módszer ✔ több választott antigén koexpressziója ✔ nagyüzemi előállítása gazdaságos ??? alacsony dózisú egyszeri/kétszeri bevitellel elérhető védettség ✔  gazdaszervezet korábbi flavivírus története befolyásolhatja a vakcina működését ???

Vírusfelszíni Szerkezeti Fehérjéket Kódoló messenger RNS (mRNS) Vakcina gazdagenomba nem integrálódó nukeotid szekvencia ✔ bármely választott fehérje (antigén) expresszióra adaptálható módszer ✔  több választott antigén koexpressziója ✔ nagyüzemi előállítása gazdaságos ???  alacsony dózisú egyszeri bevitellel elérhető védettség ✔  gazdaszervezet korábbi flavivírus története befolyásolhatja a vakcina működését ???

Túl a B sejtes immunválaszon ...

Mit tudunk a T sejtes immunválaszról Zika fertőzésben?  Eddig keveset.

2017. júliusban jelent meg S.B. Halstead elemzése, amelyben a Dengue vírus ellen fejlesztett rekombináns tetravalens Dengvaxia vakcina klinikai vizsgálati eredményeit teszi nagyító alá. (Dengvaxia/CYD-TDV gyengített élő négy-kiméra vakcina: DENV 1,2,3,4 vírus szerkezeti gének beültetése sárgaláz 17D vakcina nem-szerkezeti  gének együttesébe.)
A gondolatébresztő közlemény a T sejtes immunválasz jelentőségét hangsúlyozza a vírusfertőzés, különösen a heterotípusos újrafertőzés elleni tartós védelem kialakításában, majd rávilágít a preklinikai vizsgálatok értelmezési csapdáira. S.B. Halstead megfontolása szerint vakcina konstrukciók preklinikai funkcionális tesztelésekor nem elfogadható kritérium a vakcinálással generált neutralizáló ellenanyag jelenléte. Meglátása szerint vakcina konstrukciók tartós hatékonyságának preklinikai megítéléséhez nem elégséges bizonyíték az immunizálást követő néhány hét után provokált újrafertőzést neutralizáló anamnesztikus ellenanyag jelenléte a szervezetben, hiszen az ellenanyag koncentráció az idő függvényében jelentősen csökken. Zika fertőzésre is adaptálható gondolatmenetében a hatékony és tartós védelem kialakításához meghatározó szerepet tulajdonít a vírus nem-szerkezeti fehérjék által aktivált CD4+ / CD8+  T sejtes reakcióknak (fertőzött sejtek lízise, citokin koktél szintézise a gyengített élő vakcina által indukált B sejtes válasz tartós és hatékony megerősítésére ...).
[Scott B Halstead (2017): Achieving safe, effective, and durable Zika virus vaccines: lessons from dengue  http://www.thelancet.com/journals/laninf/article/PIIS1473-3099(17)30362-6/fulltext]

Halstead gondolatai nyomán a Zika vírus elleni védelem az alábbi két megoldást valószínűsíti.
 
Algoritmus-1
A vírusellenes védelem pillére a vírus szerkezeti fehérjékre specifikus ellenanyag, amely megakadályozza a vírus belépését további szervekbe és szövetekbe. 
(pl. Hepatitis A, Hepatitis B, Japán encephalitis vírus, Poliovirus -1, - 2, - 3, Kullancs encephalitis elleni specifikus ellenanyagok)

Zika példa
* Plazmid DNS (benne vírusfelszíni 'prM-Env' fehérjéket kódoló gének) vakcinával kezelt egerekben a CD4+ és/vagy CD8+ T limfociták eltávolítása nem csökkentette a hatékony védelmet Zika fertőzésben. [Larocca R.A. et al.(+24) (2016): Vaccine protection against Zika virus from Brazil   Nature 536:  474-478.]

Algoritmus-2

A vírusellenes védelem pillére a vírus nem-szerkezeti fehérjék útján aktivált T sejtpopuláció, amely támogatja a hatékony és tartós B sejtes/ellenanyag válasz kialakulását.
(pl. himlő, sárgaláz, kanyaró, mumpsz, rubeola, bárányhimlő vakcina)

Zika példa

* A Zika vírus terjedési tendenciája (→ szóródás DENV és WNV endémiás területeken), továbbá a DENV és Zika flavivírusok szerológiai keresztreakciója alapján feltételezhető, hogy DENV-endémiás területeken a DENV-specifikus memória T sejtek keresztreagálnak és felismerik a Zika vírust  ('heterológ immunitás'). 

Marad a kérdés: CD4+ és CD8+ T sejtes reakciók Zika vírussal fertőzött egyedekben?

Visszatérve Zika vírus szerkezeti-funkcionális jellemzőihez...

Nemrég jelent meg egy beszámoló, amely a Zika vírusfertőzés természetével és terjedésével kapcsolatos korábbi kérdések megválaszolásához támpontot nyújthat.
Annamalai A.S. és munkatársai a Zika vírusfelszíni 'E' fehérje glikozilálást, azaz az 'E' fehérje VNDT motívum glikozilált állapotát hozza összefüggésbe az immunogenitást, célsejt-célszövet tropizmust befolyásoló vírus polimorfizmussal. Alátámasztásul szolgál az a tapasztalat, miszerint VNDT  motívum volt kimutatható az utóbbi idők nagy járványait előidéző vírus izolátumokban, ámde néhány afrikai izolátumban ez a motívum nem volt azonosítható.
A vizsgált VNDT motívum a vírusfelszíni 'E' fehérje dimerekben (ld. a korábbiakban részletezett Érett virion szerkezeti jellemzők) a fúziós hurok és a dimerek közötti határfelület közelében helyezkedik el; N-glikoziláltsága, annak mértéke tehát térszerkezeti és funkcionális (vírusszaporodás, immunogenitás, terjedés, virulencia) következményekkel jár. Az 'E' fehérje glikoziláltságát meghatározó VNDT motívum deléciója, a motívumon belüli aminósav csere a vírusszaporodásban nem eredményezett szignifikáns változást sem in vivo (kísérleti állatokban), sem in vitro (szövettenyészetekben). Ami változott: a deléciós/aminósav cserélt vírus mutáns patogenitása a vad típushoz képest szignifikánsan csökkent, elsősorban a központi idegrendszert célzó neuroinvázió visszaszorulásával.
[Annamalai A.S. et al (+11) (2017): Zika Virus Encoding Non-Glycosylated Envelope Protein is Attenuated and Defective in Neuroinvasion  J. Virol. 91: e01348-17  doi:10.1128/JVI.01348-17]

Fentiekből következik a kérdés: a glikán-mutáns Zika vírus adhéziója és/vagy membránfúziója az agyi mikrovaszkularis endothel sejtek, továbbá a choroid plexus epithel sejtek felszínén módosul, netán elmarad?

Zika vakcina konstrukciók  klinikai vizsgálatokban  

• Tisztított inaktivált Zika vírus ........ hagyományos aktív immunizálás 

1. Klinikai vizsgálat NCT02963909 / 2017-11-22. állapot: folyamatban  

Klinikai vizsgálat: A Phase 1, First-in-human, Double-blinded, Randomized, Placebo-controlled Trial of a Zika Virus Purified Inactivated Vaccine (ZPIV) With Alum Adjuvant in Healthy Flavivirus-naive and Flavivirus-Primed Subjects
Szponzor: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Egycentrumos, randomizált, kettősvak (vizsgálati alanyok és a vizsgálók), placebo kontrollos háromkarú Fázis I klinikai vizsgálat két adagban (köztük 28 nap) i.m. bejuttatott tisztított inaktivált Zika vírus vakcinával (ZPIV) flavivírus-mentes (flavivírus naiv + ZPIV) és flavivírus-alapon (flavivírus JEV + ZPIV / flavivírus YFV + ZPIV). Vizsgálati karokból kiemelt kislétszámú alcsoportban + harmadik adag ZPIV bejuttatása.
Elsődleges cél: a két adagban bejuttatott ZPIV biztonságossága és hatékonysága flavivírus-mentes és flavivírus-fertőzött helyzetekben. A harmadik ZPIV adag biztonságossága és hatékonysága.  

2. Klinikai vizsgálat NCT03008122 / 2017-11-22. állapot: toborzás 

Klinikai vizsgálat: Phase I, Randomized, Double-blinded, Placebo-Controlled Dose De-escalation Study to Evaluate Safety and Immunogenicity of Alum Adjuvanted Zika Virus Purified Inactivated Vaccine (ZPIV) in Adults in a Flavivirus Endemic Area
Szponzor: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Egycentrumos, randomizált, kettősvak (vizsgálati alanyok és a vizsgálók), placebo kontrollos dóziscsökkentő (csökkenő adag két vizsgálati dózisban) Fázis I klinikai vizsgálat két alkalommal (köztük 28 nap) i.m. bejuttatott tisztított inaktivált Zika vírus vakcinával (ZPIV) a biztonságosság és a hatékonyság értékelésére.

3. Klinikai vizsgálat NCT02952833 / 2017-11-22. állapot: toborzás 

Klinikai vizsgálat: ZIKA Vaccine in Naive Subjects
Szponzor: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Egycentrumos, randomizált, kettősvak (vizsgálati alanyok és a vizsgálók), placebo kontrollos dóziscsökkentő (csökkenő három vizsgálati dózis) Fázis I klinikai vizsgálat két adagban (köztük 28 nap) i.m. bejuttatott tisztított inaktivált Zika vírus vakcinával (ZPIV) a biztonságosság és a hatékonyság értékelésére flavivírus-mentes alapon.

• Vírusfelszíni 'prM-E' vagy 'M-E' szerkezeti fehérjéket kódoló plazmid DNS vakcina

1.  Klinikai vizsgálat NCT02809443 / 2017-11-22. állapot: folyamatban

Klinikai vizsgálat: Study of GLS-5700 in Healthy Volunteers
Szponzor + Együttműködő Partner: GeneOne Life Science, Inc. + Inovio Pharmaceuticals

Többcentrumos, nem randomizált, nyílt Fázis I klinikai vizsgálat a GLS-5700 vakcina biztonságosságának, tolerálhatóságának és immunogenitásának követésére Dengue vírusmentes egyedekben.
GLS-5700: plazmid, Zika vírus prM (prekurzor membrán) és E (envelope) transzmembrán fehérjéket kódoló DNS tartalommal.

2. Klinikai vizsgálat NCT02887482 / 2017-11-22. állapot: folyamatban  

Klinikai vizsgálat: Study of GLS-5700 in Dengue Virus Seropositive Adults
Szponzor + Együttműködő Partner: GeneOne Life Science, Inc. + Inovio Pharmaceuticals 

Többcentrumos, randomizált, kettősvak Fázis I klinikai vizsgálat a GLS-5700 vakcina biztonságosságának, tolerálhatóságának és immunogenitásának követésére  Dengue vírusra szeropozitív egyedekben.
GLS-5700: plazmid, Zika vírus prM (prekurzor membrán) és E (envelope) transzmembrán fehérjéket kódoló DNS tartalommal.

3. Klinikai vizsgálat NCT02840487 / 2017-11-22. állapot: folyamatban

Klinikai vizsgálat: Safety and Immunogenicity of a Zika Virus DNA Vaccine, VRC-ZKADNA085-00-VP, in Healthy Adults
Szponzor: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Többcentrumos, randomizált Fázis I/Ib klinikai vizsgálat négyféle oltásrendben i.m. bejuttatott Zika vírus DNS vakcina (VRC-ZKADNA085-00-VP) biztonságosságának, tolerálhatóságának és immunogenitásának követésére.
Vakcina: Zika vírus H/PF/2013 törzs prM (prekurzor membrán) és E (envelope) transzmembrán fehérjéket kódoló cirkuláris DNS plazmid.

4.  Klinikai vizsgálat NCT02996461 / 2017-11-22. állapot: folyamatban

Klinikai vizsgálat: VRC 320: A Phase I, Randomized Clinical Trial to Evaluate the Safety and Immunogenicity of a Zika Virus DNA Vaccine, VRC-ZKADNA090-00-VP, Administered Via Needle and Syringe or Needle-free Injector, PharmaJet, inHealthy Adults
Szponzor: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Egycentrumos, randomizált Fázis I klinikai vizsgálat  háromféle oltásrendben és módban im. bejuttatott Zika vírus DNS vakcina (VRC-ZKADNA090-00-VP) biztonságosságának, tolerálhatóságának és immunogenitásának követésére.
Vakcina: Zika vírus H/PF/2013 törzs prM (prekurzor membrán) és E (envelope) transzmembrán fehérjéket kódoló cirkuláris DNS plazmid.

• Vírusfelszíni szerkezeti fehérjéket kódoló messenger RNS (mRNS) vakcina

1. Klinikai vizsgálat NCT03014089 / 2017-11-22. állapot: toborzás 

Klinikai vizsgálat: Safety, Tolerability, and Immunogenicity of mRNA-1325 in Healthy Adult Subjects
Szponzor + Együttműködő Partner: Moderna Therapeutics + Biomedical Advanced Research and Development Authority

Többcentrumos, randomizált, placebo kontrollos, dózis-kereső Fázis I/II vizsgálat a Zika mRNS 1325 vakcina biztonságosságának, immunogenicitásának követésére egészséges egyedekben, nem Zika-endémiás régiókban.

(Forrás: ClinicalTrials.gov)

Az idővel versenyző  Zika vakcina fejlesztést és az eddigi klinikai vizsgálatokat értelmező rövid kritikus összefoglaló elérhetősége:
[Chris Morrison(2016): DNA vaccines against Zika virus speed into clinical trials Nature Reviews Drug Discovery 15: 521–522.]

Alternatív út a Zika fertőzés kezelésére, a fertőzés megelőzésére

 

Anti-Zika Kemoterápia

[Pascoalino B.S. et al.(2016): Zika antiviral chemotherapy: identification of drugs and promising starting points for drug discovery from an FDA-approved library  PMCID: PMC5112578]

A figyelemre méltó közlemény újdonsága FDA-engedélyezett hatóanyagok HCS/High Content Screening azaz képalkotó analízissel kiegészített robusztus farmakológiai szűrővizsgálata Zika vírussal (KX197192.1/Pernambuco-Brazil/2015) fertőzött in vitro sejtekben (human hepatoma sejtek=Huh7; Aedes albopictus sejtek=C636; HB-112 egér hibridóma sejtek ascites termelése). A Zika vírussal 72h inkubálást igénylő módszer előnye, hogy a vírusfertőzés lépései, a célsejtek vírus által érintett régiói (→ indirekt immunfluoreszcencia anti-'E' monoklonalis ellenanyaggal) a vizsgált vegyületek hatásával együtt klasszikus morfológiai megközelítésben értékelhetők. A vizsgált vegyületek antivírus hatékonyságát rekombináns IFNα2A referencia készítményhez viszonyítva értékelték.
725 készítményből a szelektivitás, az alacsony toxicitás, a hatékonysági maximum alapján öt hatóanyag volt kiemelhető további vizsgálatokra. Szembeötlő, hogy az öt hatóanyag kémiai és  farmakológiai szempontból egyaránt eltérő.
→ Lovastatin (lipidcsökkentő: HMG-CoA reduktáz gátlás)
→ 5-Fluorouracil (daganatellenes szer: timidilát szintáz irreverzibilis gátlás)
→ 6-Azauridine (daganatellenes és psoriasis elleni szer, széles spektrumú antimetabolit, DNS vírus/RNS vírus szaporodás gátlás)
→ Palonosetron (5-HT₃ antagonista, antiemetikum)
→ Kitasamycin (makrolid antibiotikum) 

Nobel díj 2017

Fiziológia Orvostudomány A biológiai óra, bioritmus (cirkadián oszcillációk) szabályozásában szereplő molekuláris mechanizmusok feltárása.	Hall, J.C. Rosbash, M. Young, M.W.	Hivatkozások  (továbbiak:  www.nobelprize.org ; Pubmed) Zehring W.A., Wheeler D.A., Reddy P., Konopka R.J., Kyriacou C.P., Rosbash M., and Hall J.C. (1984): P-element transformation with period locus DNA restores rhythmicity to mutant, arrhythmic Drosophila melanogaster      Cell  39: 369-376. Siwicki K.K., Eastman C., Petersen G., Rosbash M., and Hall J.C. (1988): Antibodies to the period gene product of Drosophila reveal diverse tissue distribution and rhythmic changes in the visual system   Neuron  1: 141-150. Veleri S., Brandes C., Helfrich-Förster C., Hall J.C., Stanewsky R.A. (2003): A self-sustaining, light-entrainable circadian oscillator in the Drosophila brain. Curr Biol.  13: 1758-1767. Bamne M.N., Ponder C.A., Wood J.A., Mansour H., Frank E., Kupfer D.J., Young M.W., Nimgaonkar V.L.(2013): Application of an ex vivo cellular model of circadian variation for bipolar disorder research: a proof of concept study    Bipolar Disord. 15: 694-700. Crane B.R., Young M.W. (2014): Interactive features of proteins composing eukaryotic circadian clocks   Annual Rev. Biochem. 83: 191-219. Garaulet D.L., Sun K., Li W., Wen J., Panzarino A.M., O'Neil J.L., Hiesinger P.R., Young M.W., Lai E.C.(2016): miR-124 Regulates Diverse Aspects of Rhythmic Behavior in Drosophila  J Neurosci. 36: 3414-3421. Vienne J., Spann R., Guo F., Rosbash M. (2016): Age-Related Reduction of Recovery Sleep and Arousal Threshold in Drosophila Sleep 39: 1613-1624. ...................................................................................................... Scientific Background Discoveries of Molecular Mechanisms Controlling the Circadian Rhythm The Nobel Assembly at Karolinska Institutet
Fizika LIGO detektor  (lézer interferométer gravitációs hullám vizsgáló - Laser Interferometer Gravitational-Wave Observatory); gravitációs hullámok közvetlen megfigyelése.	Weiss, R. (1/2) Barish, B.C.(1/4)  Thorne, K.S.(1/4)	Hivatkozás (továbbiak:  www.nobelprize.org) Scientific Background on the Nobel Prize in Physics 2017 THE LASER INTERFEROMETER GRAVITATIONAL-WAVE OBSERVATORY AND THE FIRST DIRECT OBSERVATION OF GRAVITATIONAL WAVES The Nobel Committee for Physics
Kémia Krio-elektronmikroszkóp fejlesztés: biomolekulák nagyfelbontású szerkezet-meghatározása oldatban.	Dubochet, J. Frank, J. Henderson R.	Hivatkozás (továbbiak:  www.nobelprize.org) Scientific Background on the Nobel Prize in Chemistry 2017 THE DEVELOPMENT OF CRYO-ELECTRON MICROSCOPY
Irodalom Erős érzelmi töltéssel írt novellái felfedik az ember és világa közti illuzórikus kapcsolat mélységeit.	Kazuo Ishiguro	Hivatkozás (továbbiak:  www.nobelprize.org) Biography Film adaptáció: Napok Romjai (1993) 134 min
Béke  Elismerése a kitartó ismeretterjesztő és figyelemfelkeltő  tevékenységnek, amely rámutat a bármilyen nukleáris fegyver alkalmazását követő  humanitárius (és környezeti, azaz teljeskörű) katasztrófákra, továbbá,  elismerése a nukleáris fegyverek egyezményes betiltása érdekében eddig tett rendkívüli erőfeszítéseknek.	Nemzetközi Szervezet a Nukleáris Fegyverek  Betiltására  -ICAN- International Campaign to Abolish Nuclear Weapons	Hivatkozás (továbbiak:  www.nobelprize.org) 2007 - Ausztrália: a nukleáris fegyverek bevetésének katasztrofális következményeit hangoztató globális civil szerveződés -ICAN- megalakul.  Cél: a nukleáris fegyverek nemzetközi egyezményes betiltása.
Közgazdaságtan  "... a viselkedési közgazdaságtanban elért eredményeiért...".	Thaler, R.H.	Hivatkozás (továbbiak:  www.nobelprize.org) Scientific Background on the Sveriges Riksbank Prize in Economic Sciences in Memory of Alfred Nobel 2017 RICHARD H. THALER: INTEGRATING ECONOMICS WITH PSYCHOLOGY The Committee for the Prize in Economic Sciences in Memory of Alfred Nobel

Copyright© www.bioteomed.org

Kapcsolat: btm(kukac)bioteomed(pont)org

természet, tudomány, kutatás, fejlesztés, ipar, biológia, fizika, kémia, mezőgazdaság, medicina, gyógyszer, szabadalom, technológia, irodalom, művészet, oktatás